蛋白的使用以及存储
重组蛋白中不含载体蛋白(Carrier Protein)或其他添加剂(如BSA、HAS或蔗糖等),并且
通过常以*少量的盐来进行冻干处理,因此微量的细胞因子在冻干过程中会沉积于管内,形成很薄或不可见的蛋白层。所以我们建议在收到产品后,务必在开盖前先离心,使粘在管盖或管壁上的蛋白聚集于管底(此时能否见到白色沉淀均属正常现象)。
1、 离心:高速离心(10000rpm)20-30秒,或低速离心(2000rpm)5分钟。
2、 溶解:用去离子水或其他缓冲液(根据说明书要求进行选择)溶解至说明要求的浓度(一般为0.1-1.0mg/ml),如10ug的产品,需用10ul-100ul的去离子水或缓冲液溶解)。溶解时不可振荡,避免因化学键的断裂造成蛋白失活,可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间,待细胞因子完全溶解后使用。溶剂的选择:
1) 要求用去离子水溶解的产品,务必不可用盐溶液,避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出;
2) 要求用盐溶液溶解的产品,请依照说明书上的浓度,同样也是为了避免过高的盐浓度。
3、分装和储存:蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液,稀释可用RPMI 1640、DMEM或PBS等溶液,其中*好含有5-10%的FCS(小牛或胎牛血清)或0.1%的BSA(牛血清白蛋白)来稳定蛋白。工作液在4℃可保存一周,如需长期保存,则需分装冻存于-20℃(注意:不可冻存于-80℃)。分装时每管中工作液的体积*好是一次实验的用量,以实现每次实验用完一只工作量,避免反复冻融引起蛋白活性的降低。
细胞因子和蛋白的使用说明
1、 正确性:经N端序列分析。必要时,使用SDS-PAGE,RP-HPLC和质谱分析等方法与标准品进行比对。
2、 纯度:经SDS-PAGE和RP-HPLC分析。
3、 生物活性:经相关的体外或体内生物活性检测。
4、 蛋白含量:经紫外分光光度和SDS-PAGE分析。有些特殊产品的定量使用HPLC法与己校准的标准品进行比对。
5、 内**含量:经动态LAL(鲎试剂)法测定,所有产品内**含量均低于标示量。
6、 微生物污染:所有蛋白溶液在分装冻干前经0.22um滤膜过滤**,分装在一万级洁净室条件下的超净台完成;冻干在一万级洁净室条件下完成。
为什么有些产品中我能看到白色蛋白粉末而有些产品管中看不到蛋白粉末?
答:与市场上的有些蛋白产品不同,绝大部分的产品中不含载体蛋白或其他添加物(如牛血清白蛋白(BSA),人血清白蛋白(HSA)和海藻糖等),并且以*低含盐量的溶液冻干。因此,微量的蛋白在冻干过程中沉积在管内,形成很薄或几乎看不见的蛋白层,甚至蛋白粉末还会飘悬在管壁上。打开管盖前,我们建议在离心机中快速离心20-30秒,使附着在管盖或管壁的蛋白粉末聚集到管底。
对于蛋白产品的稳定性,我们应该了解哪些信息?
答:除非在产品说明书中特别注明,我们绝大部分产品均为冻干粉,它们在室温条件下非常稳定。尽管如此,我们还是建议您将冻干粉产品储存于-20℃冰箱中。对于大多数产品,复溶后在4℃条件下仅能短期保存。如果想长期保存,请先配置成稀释液(其中须含载体蛋白,如0.1%BSA等),然后根据实验情况分装成小份冻存于-20℃,每次实验仅取一小份,避免反复冻融。请注意,每次冻融均会引起蛋白的部分失活,而且不同蛋白失活的程度不一。