DAPI,DAPI 4',6-Diamidine-2'-phenylindole dihydrochloride,4，6-联脒-2-苯基吲哚,4',6-di

DAPI

DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)﹐是一种能够与DNA中大部分A，T碱基相互结合的荧光染料﹐常用于荧光显微镜观测。因为DAPI可以透过完整的细胞膜﹐它可以用于活细胞和固定细胞的染色。

　　在荧光显微镜观察下，DAPI染剂是利用紫外光波长的光线激发。当DAPI与双股DNA结合时，*大吸收波长为358nm，*大发射波长为461nm，其发散光的波长范围含盖了蓝色至青绿色。DAPI也可以和RNA结合，但产生的荧光强度不及与DNA结合的结果，其发散光的波长范围约在400nm左右。

　　DAPI的发散光为蓝色，且DAPI和绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein, GFP)或Texas Red染剂(红色荧光染剂)的发散波长，仅有少部分重叠，研究员可以善用这项特性在单一的样品上进行多重荧光染色。

　　DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。使用过程中应注意操作与抛弃的处理程序。

　　DAPI

　　中文名：4，6-联脒-2-苯基吲哚(?)

　　英文名：4',6-diamidino-2-phenylindole，2-(4-amidinophenyl)-1H -indole-6-carboxamidine，DAPI dihydrochloride

　　分子式：C16H15N5

　　分子量：277.324

　　CAS number：28718-90-3

　　光谱性质：与双链DNA结合时*大吸收/*大发射为358 nm/461 nm；与RNA结合时，*大发射移动到400 nm左右。

　　染色原理：

　　DAPI 为一种荧光染料，可以穿透细胞膜与细胞核中的双链DNA结合而发挥标记的作用，可以产生比DAPI自身强20多倍的荧光，和EB相比，对双链DNA的染色灵敏度要高很多倍。显微镜下可以看到显蓝色荧光的细胞，荧光显微镜观察细胞标记的效率高(几乎为100 %) ，且对活细胞无毒副作用。DAPI染色常用于细胞凋亡检测，染色后用荧光显微镜观察或流式细胞仪检测。DAPI也常用于普通的细胞核染色以及某些特定情况下的双链DNA染色。细胞经热激处理后用DAPI染色3分钟，在荧光显微镜下可以看到到细胞核的形态变化。

　　a、 正常的**细胞核：核形完整，染色质均匀。

　　b、 染色质固缩，向外周聚集，形成周边化。

　　c、 染色质进一步固缩，形成很多颗粒物质。

　　d、 细胞核破裂形成碎片，核解体。

　　染色步骤：

　　在细胞移植前，将DAPI 以一定的浓度加入培养基中，与细胞共同孵育过夜，用PBS 缓冲液漂洗至少6 次以洗掉未结合的DAPI，在用酶消化后离心收集细胞，加入DMEM 培养基制成细胞悬液以备用。

　　存储条件：-20℃避光保存

　　注意事项：

　　1、DAPI强烈致癌，操作时要戴上手套。

　　2、贮存液用70%酒精配制，浓度100 µg/ml，可用黑纸包住，长期冻存。使用液按1:1000用PBS稀释，*终浓度100 ng/ml。

　　3、DAPI是非常优良的DNA染料，固定过和没有固定过的活细胞均可用DAPI染色。

Roche相关产品信息

Commercial Product Name:  DAPI  4',6-Diamidine-2'-phenylindole dihydrochloride

Mat.-No./ Genisys-No.: 10236276001

CAS-No.: 28718-90-3

EINECS-No.: 249-186-7

Molecular formula: C16H17Cl2N5

Molecular Weight: 350.3

Form: solid

Colour: white or yellowish

pH: 4 - 5 10 g/l at 20 °C

Application:DAPI is a fluorescent dye that specifically stains double-stranded DNA and is used for the fluorescence-microscopic detection of mycoplasma in cell culture. Contents:Powder, crystallized, non-sterile

Purity:>90% (from N)

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